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          你知道如何使用貝克曼DNA純化試劑盒從動物組織中提取基因組DNA嗎?

          更新時(shí)間:2022-01-19      瀏覽次數(shù):1122
             貝克曼DNA純化試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了這一特性,將植物樣品凍結(jié)融解后,再使用PipetTip的將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經(jīng)過了改良,熱處理時(shí)間只需15分鐘,使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。
            全套操作約需1小時(shí),分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟,詳細(xì)說明如下。
            勻漿和細(xì)胞裂解:
            使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟,具體說明如下:
            使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):
           ?、偃?~100mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
            注)下列組織請加液氮研磨至粉末狀。
            A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
            B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
            C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織(如骨骼)等。
           ?、诩尤?50μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1,溫和研磨30秒鐘。
            注)使用上述①-注)的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),請?jiān)诩尤隨olutionA及RNaseA1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
           ?、凼占?50μl研磨好的組織勻漿液移至CollectionTube中。如果勻漿體積不足650μl,請補(bǔ)充SolutionA至650μl,65℃保溫5分鐘。
            使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):
           ?、偃?~100mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的CollectionTube中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
            ②加入350μl的SolutionA和0.9μl的RNaseA1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
           ?、奂尤?50μl的SolutionA將研磨棒上的勻漿沖入CollectionTube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。

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